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贴壁细胞的冻存

来源:admin  浏览量:  发布时间:2018-12-18 13:43:40


本视频为普诺赛贴壁细胞传代培养操作指南,对每一步操作都做了演示,以便实验者更好地理解贴壁细胞传代实验过程。

贴壁细胞传代实验准备:
15mL离心管、T25细胞培养瓶、PBS缓冲液、移液管、电动移液器等物品提前放入生物安全柜中,紫外照射30min消毒灭菌;
细胞完全培养基、0.25%胰酶-0.02%EDTA4℃冰箱中取出后,复温至室温,备用。


贴壁细胞传代实验步骤:
1. 将准备好的培养基等物品用酒精消毒后放入安全柜中;
2. 从培养箱中取出待处理的细胞,在显微镜下观察细胞状态;
3. 用酒精消毒培养瓶,放入安全柜中;
4. 轻轻吸去细胞上清;
5. 加入2~3ml PBS缓冲液润洗一次,吸去上清;
6. 加入1mL 0.25%胰酶-0.02%EDTA,轻轻晃匀、覆盖所有细胞后,置于37℃培养箱静置消化;
7. 消化1min左右,在显微镜下观察细胞消化情况;         
8. 消化完全后,加3ml完全培养基终止;
9. 按比例将细胞悬液分装至培养瓶中;
10. 在显微镜下观察传代后的细胞密度及状态;                 
11. 将培养瓶放入培养箱中培养。


注意事项:
1)培养过程中需维持细胞处于对数生长期,80%左右即可传代,传代比例请参照说明书建议;

2)消化时间不宜过长,大部分细胞回缩变圆并有少量细胞脱落即可中止消化,难消化的细胞可分次消化,每次时间不超过5min;
3)培养过程中需要定期换液,一般细胞建议2~3天换液一次。