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细胞传代操作步骤

来源:admin  浏览量:  发布时间:2016-07-05 13:54:38

一、贴壁细胞传代

  1. 1.提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热,用75%酒精擦拭后再放入超净台内。

  2. 2.吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液,加少量PBS润洗细胞。

  3. 3.加入适量胰酶,使胰酶的量能盖住细胞,37℃孵育,每隔2~3min显微镜下观察,待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶,加入新鲜培养基,晃动细胞瓶,终止胰酶作用。

  4. 4.用吸管小心吹打贴壁的细胞,制成细胞悬液。控制吹打的力度,避免产生大量的气泡。

  5. 5.将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养,隔天观察贴壁生长情况。

二、悬浮细胞传代

  1. 1.将细胞悬液转移到无菌离心管内,1000rpm离心5min。

  2. 2.弃去上清,加入新鲜的培养基,用吸管小心吹散沉淀,制成细胞悬液。

  3. 3.将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养。

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