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细胞铺板的3种手法,这样铺更均匀!

来源:admin  浏览量:  发布时间:2019-03-19 15:10:53

细胞铺板是细胞实验中最常见又必须掌握的一门技术,看似简单,然而却经常遇到如细胞居中或者中间稀疏等不均匀分布的现象,结果就是只能整板扔掉,重新铺板,既耽搁时间又浪费了细胞及培养板等资源。历经多次失败后,你才会发现,原来细胞铺板是有规律可循的,今天我们就聊一聊:细胞铺板的3种手法。

首先,我们来看看细胞铺板不均匀的3种最常见情况:

1,中间多,周围少



2,中间少,四周多



3,呈现一坨一坨的状态


这么多种不均匀的情况,到底该怎么拯救呢?一起来看看细胞铺板的三种手法:
手法一:均匀单层

要铺成那种很均匀的单层细胞,手法如下:

1,细胞板子先加入一定量(一般是总量培养基的1/5)的培养基,放入孵箱中放置10-20min。

2,在滴入细胞时,细胞板子与通风橱有一定的角度,沿着板壁的孔边缘滴入。


3,滴入后,呈“8”字方法摇晃5-8次。

4,置于水平台上,放置10-20分钟

5,放入孵箱。
在细胞铺板时,每一种板子的孔面积有多大,培养的液体量以及加入细胞量如下:



手法二:中间少,周围多
其实细胞铺板不一定都需要单个单个的那么均匀,比如,做免疫荧光时,学霸姐姐喜欢铺中间少,周围稍多的板子,

因为这个样子可以同时检测到单个细胞的形态,另外又可以照一点低倍的用作于统计,所有的细胞都在一个环境中。

特别说明一下:这里的多也只是相对于多,细胞也是单层的。



中间


周围

要铺这样的细胞样子,那铺细胞时要注意手法了:
1,细胞板子不需要提前用培养基润洗,直接从边上滴入混有细胞的培养基。

2,放置30s-1min后,前后摇晃5-8次。

3,放在水平台上静置2-5min。

4,放入孵箱。

手法三:中间多,周围少

学一般在提取蛋白或者提取RNA的时候,可以这样铺板,因为有些细胞刮刀不好用,没有办法刮到周围的。想要铺中间多,周围少的板子,手法如下:

1,细胞板子不需要提前润洗,从中间滴入进去后。

2,把板子朝一个方向顺时针或者逆时针旋转3-5圈。

3,水平台上静置2-5min。

4,放入孵箱。




总结一下:想要细胞铺板铺得好,背景知识很重要
其实在铺细胞的时候,你要准确的知道你所养的细胞的特性,比如:

1,细胞的名称,来源。

2,细胞的属性。

3,细胞分裂时间。
还有,最主要的是要搞清楚你的细胞的生长曲线,还要知道铺板后多久可以到达什么细胞密度。

如果你准确的掌握了你的细胞特性,那铺板是分分钟搞定的事情。

细胞铺板后,细胞状态不好怎么办?

如果出现这种情况,学霸姐姐建议你从以下几个方面考虑一下原因:

1,用来铺板的细胞状态本身就不好。

2,用来铺板的细胞传代次数太多,有些老化。

3,胰酶消化时间过长。

4,中和的血清量及时间不够。

5,支原体污染。
细胞铺板是一个经验积累的过程,你的手法也需要积极的改进,不要生搬硬套,也不要一味追求绝对的铺均匀,在实验过程中多思考细胞本身的特征和属性,出现问题积极解决即可。