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原代细胞传代方法哪有几种?

来源:admin  浏览量:  发布时间:2019-03-28 10:40:53

  原代细胞是指从机体的组织(如人组织、小鼠组织、大鼠组织和兔组织等)经蛋白酶或其它的方法获得单个细胞并在体外进行模拟机体培养的细胞,称为原代细胞。

  一般认为,培养的原代的第1代细胞和传代到第10代以内的细胞统称为原代细胞培养。在人工条件下使其原代细胞生存、生长、繁殖和传代,进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。

  那么关于原代细胞的传代培养,我们应该怎么做呢?一般有以下两种方法:

  一、贴壁细胞的消化法传代

  1、吸除或倒掉瓶内旧培养液。

  2、加入1ml左右消化液(胰蛋白酶或与EDTA混合液)轻轻摇动培养瓶,使瓶底细胞都浸入溶液中。

  3、消化2-5分钟后把培养瓶放置在显微镜下进行观察,发现原贴壁的细胞逐渐趋于圆形,在还未漂起时,弃去消化液,加入培养液终止消化。

  4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液,分别接种到另外两到三个培养瓶中,置37℃培养箱中继续培养。第二天观察贴壁生长情况。

  二、悬浮细胞的传代

  1、直接传代

  ① 让悬浮细胞慢慢沉淀在瓶底后,将上清吸掉1/2-2/3。

  ② 用吸管吹打形成细胞悬液后,分别接种到另外两到三个培养瓶中,置37℃培养箱中培养。

  2、离心法传代

  ① 将细胞连同培养液一并转移到离心管内,离心800-1000rpm,5分钟。

  ② 去除上清,加新的培养液到离心管内,用吸管吹打使之形成细胞悬液。

  ③ 将细胞悬液分别接种到另外两到三个培养瓶中,置37℃培养箱中培养。