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双管齐下!Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡

来源:admin  浏览量:  发布时间:2019-06-28 13:13:29

  细胞死亡的方式主要有两种,包括细胞坏死(necrosis)和细胞凋亡(apoptosis)。细胞坏死是早已被认识到的细胞死亡方式,而细胞凋亡是近年来逐渐被认识且越来越受到重视的细胞死亡方式。两种死亡方式最重要的区别是细胞坏死会释放出细胞内溶物,引起炎症反应,而细胞凋亡不会暴露细胞内溶物,一般被吞噬细胞吞噬清除,不引起炎症反应。

  细胞凋亡(apoptosis)指为维持机体内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡。凋亡的发生并不是一蹴而就,因此,针对不同凋亡事件的检测方法众多种多样,常用的方法包括细胞的形态学观察,磷脂酰丝氨酸外翻分析,检测线粒体膜势能,检测片段化的DNA所采用的Tunel法,Caspase活性检测,凋亡相关蛋白的检测等。

  今天,我们讨论的方法是——磷脂酰丝氨酸外翻分析,也就是通过Annexin V和PI的联合使用,最终可判断细胞凋亡的各个阶段,这个方法是目前非常热门的研究方法,被大家广泛使用。

  那么,Annexin V/PI法的原理是什么?

  正常细胞膜的磷脂分布是不对称的,活细胞中磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)位于细胞膜的内表面,细胞凋亡时,细胞膜发生变化,PS从细胞膜的内表面翻转到细胞膜的外表面。

  annexinV是一种对PS有高度亲和力的、钙依赖性的磷脂结合蛋白,annexinV可以特异性地识别凋亡细胞表面的PS,而活细胞的PS位于细胞膜的内表面,无法与annexinV特异性结合。

  所以可以用FITC偶联的annexinV鉴别凋亡细胞和活细胞。

  坏死细胞的PS也会从细胞膜的内表面翻转到细胞膜的外表面,annexinV也能识别坏死细胞表面的PS,所以annexinV无法区分坏死细胞和凋亡细胞。

  而PI染料能够与细胞内的DNA结合,区分坏死细胞和活细胞。凋亡细胞和活细胞的细胞膜仍然完整,PI染料无法自由通过细胞膜进入细胞内与DNA结合,所以PI染料无法标记凋亡细胞和活细胞,而PI染料却能够通过坏死细胞的细胞膜与细胞内的DNA结合,坏死细胞内PI染料被488nm激光激发后会发射红荧光,被FL2或FL3通道接收。

  所以annexinV和PI同时使用,就可以双管齐下,区分活细胞、凋亡细胞和坏死细胞,这就是annexinV/PI双染色法检测细胞凋亡的原理。

  Annexin V和PI联用检测细胞凋亡示意图如下:

11.png

  细胞消化重悬后,加入Annexin V和PI以及染色Buffer,正常细胞不会被Annexin V和PI标记上。

12.png

  早期凋亡的细胞,膜内侧的磷脂酰丝氨酸外翻(图中粉色结构),此时磷脂酰丝氨酸会和Annexin V结合。

13.png

  晚期凋亡的细胞,膜结构破损,此时PI会进入细胞,故晚期凋亡的细胞会被Annexin V和PI标记上。


  Procell Annexin V-FITC/PI检测试剂盒实验效果图如下:

TIM截图20190628133658.png

  Jurkat细胞用1μM喜树碱(Camptothecin) (左) 或未加药 (右) 处理4 h,Annexin V-FITC/PI检测试剂盒染色后FCM检测。Annexin V-FITC单阳为早期凋亡细胞,Annexin V-FITC和PI双阳细胞为坏死或晚期凋亡细胞,PI单阳细胞为裸核细胞。


  Procell检测细胞凋亡产品列表


货号产品名称规格

P-CA-101Annexin V-FITC50T/100T/200T/500T

P-CA-103Annexin V-AF64750T/100T/200T/500T

P-CA-105Annexin V-PE50T/100T/200T/500T

P-CA-107Annexin V-APC50T/100T/200T/500T

P-CA-151Annexin V Binding Buffer (10×)10mL/50mL

P-CA-161碘化丙啶(PI)染色液50T/100T/200T/500T

P-CA-1627-AAD染色液50T/100T/200T/500T

P-CA-201Annexin V-FITC/ PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒20T/50T/100T/200T

P-CA-202Annexin V-FITC/ 7-AAD荧光双染细胞凋亡检测试剂盒20T/50T/100T/200T

P-CA-203Annexin V-AF647/ PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒20T/50T/100T/200T

P-CA-204Annexin V-AF647/ 7-AAD荧光双染细胞凋亡检测试剂盒20T/50T/100T/200T

P-CA-206Annexin V-PE/ 7-AAD荧光双染细胞凋亡检测试剂盒20T/50T/100T/200T

P-CA-207Annexin V-APC/ PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒20T/50T/100T/200T

P-CA-208Annexin V-APC/ 7-AAD荧光双染细胞凋亡检测试剂盒20T/50T/100T/200T

  温馨提醒:

  如果您想要详细了解及选购Annexin V系列检测试剂盒,在网页最上方的搜索框搜索上述产品货号或关键字即可,如果您有任何疑问也可以点击右方的在线咨询,专业技术人员将为您提供解答。