细胞学堂丨养不好RAW 264.7，是因为忽略了这几点，RAW264.7分化有哪些问题要注意

养过RAW 264.7细胞系的小伙伴，都容易为一个问题感到苦恼：它太容易分化了！到底怎样才能养好它呢？RAW264.7细胞培养注意事项有哪些，今天我们就给大家分享一些心得。 

RAW264.7细胞培养之基础篇

RAW264.7细胞培养的第一步，是要对它的基础培养条件了如指掌，比如生长特性、细胞形态、所需的培养基，甚至培养环境、传代比例等等，做到知己知彼，才能百战百胜。

▲产品详情  细胞系:RAW 264.7  培养基:CM-0190

▲RAW264.7细胞生长图片

RAW264.7细胞培养之进阶篇1

除了基础条件，其他外界因素也容易引起细胞的“小脾气”，比如运输路上的颠簸、传代方法等等。针对几种常见的问题，今天来一 一为大家解答。

问题1 ：收货后，细胞不见了

普诺赛总是会收到这类反馈：收到细胞，期待值满满地打开包装准备细胞培养，但在显微镜下却找不到细胞！这是因为RAW 264.7 细胞贴壁较松，快递运输路上受到颠簸，可能会脱落。脱落的细胞悬浮在培养基中不容易聚焦。这时候不用担心，把细胞放进培养箱静置两个小时就可以看到了。如果静置后看到的细胞仍偏少，请将瓶子里的培养基都转移到离心管里，1200 rpm（约250g）离心3分钟，即可看到沉淀的细胞。细胞全部脱落，慌乱之下可能会一个细胞都找不着。这个时候离心验证是最好的方法。

问题2 ：收货处理后，细胞不贴壁

将细胞离心收集，用新鲜的培养基重悬细胞放到新的细胞培养瓶里之后，可能会出现细胞成团漂浮、不贴壁的情况。这种情况下，把细胞离心收集，用1 mL培养基重悬，慢慢地，轻轻地吹打，直到细胞被吹成单细胞，就可以重新铺板了。RAW 264.7脱落后倾向于抱团，抱团时细胞是活着的，但很难贴壁。记得一定要把聚成团的细胞吹散成单细胞，不然细胞很难重新贴壁。

RAW264.7细胞培养之进阶篇2 

正确的传代方法是RAW264.7细胞培养的关键，每一步操作都要细致入微，稍有不慎细胞就分化了。RAW264.7细胞不能用胰酶消化，许多实验室用细胞刮传代，这是一种非常经典好用的方法。普诺赛在RAW264.7细胞培养这十几年里，摸索出一个更不错的方法：吹打传代。吹打传代操作简单，对细胞培养的新手们更友好，也能更好地控制细胞分化率。

传代步骤：

1)     轻拍几下培养瓶
2)     用5ml的移液器直接吹下来（不要用巴氏管吹，巴氏管力道过小，容易吹不下干净细胞）
3)     细胞吹下来后转移到15ml离心管
4)     1200rpm （约250g）离心3min
5)     去上清，用新鲜培养基重悬细胞
6)     按密度（1*10^5 cells/ml的浓度)接种到新的培养瓶中

传代时机：

1)     当细胞密度较低的时候，可能不太好吹下来。

2)     当细胞密度达到80%~90%的时候，最容易吹下。

▲推荐的RAW264.7细胞传代密度

RAW 264.7细胞培养之终结篇

讲了那么多如何处理RAW264.7巨噬细胞分化的情况，那分化了的细胞到底是什么形态呢？

l  分化的细胞呈多角形，体积明显增大，时常有较长的黑色触角

▲分化的RAW 264.7细胞形态

RAW264.7细胞培养注意事项：

1.    我们发现，RAW264.7巨噬细胞三天不传代更容易分化，很难吹下，每一次接种密度都要控制好；

2.    分化的细胞贴壁牢固，传代的时候千万不要强制性吹下这些细胞，只接种容易吹下的那些未分化细胞；

3.    吹打的力度一定要轻，切勿暴力吹打；细胞的贴壁性和培养器皿的材料也有关，有时RAW264.7细胞会出现太容易吹下的情况，连分化细胞都贴壁较松，此时更适宜用巴氏管吹打；

4.    培养时，无法保证100% 不分化，通过传代可以将分化比例控制在一定范围

5.    RAW264.7细胞分裂活跃，记得每天看一看，周末也要抽点时间关心一下它哦~

小知识

RAW 264.7细胞系的起源

加利福尼亚索尔克研究所的W. C. Raschke在雄性BAB/14小鼠腹腔注射A-MuLV（Abelson鼠科白血病病毒）诱发肿瘤的腹水中建立了RAW 264细胞系。他发现RAW 264可以胞饮中性红并吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖，并且能通过抗体依赖途径分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞。RAW 264.7不分泌A-MuLV（但用Moloney MuLV 拯救后可以在上清检测到病毒），对LPS非常敏感。该研究1978年发表在《CELL》杂志。 [2]

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