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细胞学堂 | 收到的细胞脱落了?碎片多?黑点多?

来源:Procell  浏览量:  发布时间:2021-11-30 16:51:09

科学研究中需要用到各种细胞系作为实验模型,这些细胞系通常可以从各大细胞库获取。


而在收到细胞库寄送来的常温细胞时,常常会遇到一些问题,比如细胞脱落皱缩有黑点


这篇文章将帮助大家解决这些常见问题。


 收货时,细胞脱落

01



有些细胞本身贴壁不牢,很容易造成细胞脱落(如293系列,TM3,TM4,Raw264.7,原代内皮细胞,原代平滑肌细胞)。


另外,运输过程中受到碰撞或气温过低,也可能导致细胞脱落。


处理办法

脱落细胞进行离心收集,并在离心管中消化

② 仍然贴壁的细胞,按照常规方法加入胰酶或其他解离剂消化。

③ 再将消化好的脱落细胞和贴壁细胞混合,按比例接种到新的培养器皿中。


常温运输的C2C12细胞收货时发现脱落
常温运输的C2C12细胞收货时发现脱落

▲ 常温运输的C2C12细胞收货时发现脱落细胞


C2C12细胞处理后第二天

▲C2C12细胞处理后第二天,

有少量漂浮细胞

C2C12细胞处理后第四天

▲C2C12细胞处理后第四天,

细胞正常生长

(图片由客户提供,仅供学习参考)


 收货时,细胞皱缩

02



运输过程中,路途颠簸加上温度不稳定,常温细胞会发生回缩。


处理办法

放入培养箱静置2-4小时,若4小时后仍然没有伸展,延长静置时间。注意,过夜静置时,需倒出部分培养基,留5-10mL在瓶中,瓶盖拧松透气,保持气体交换(L15培养体系除外)。

若有脱落细胞,需离心收集。


SH-SY5Y细胞发货前状态

SH-SY5Y细胞发货前状态

(普诺赛提供)

SH-SY5Y细胞收货后状态

▲SH-SY5Y细胞收货后状态
(客户提供)

SH-SY5Y细胞收货时

▲ SH-SY5Y细胞收货时

皱缩、脱落

SH-SY5Y细胞

▲ SH-SY5Y细胞

处理后第三天

(图片由客户提供,仅供学习参考)


收货时,细胞黑点较多

03



当受到运输环境影响时,细胞会发生应激反应,分泌活动增加,导致分泌蛋白增多,呈黑色圆球状,分布无规律。


同时,路途中凋亡的细胞碎裂后将产生细胞碎片,为黑色或透明色,呈不规则状,分布无规律。


另外,有些细胞本身分泌活动较强,培养时常伴随黑点。


处理办法

贴壁细胞放培养箱静置2-4小时后,正常换液或传代;

悬浮细胞800~1000rpm(约160~200g) 低速离心3min去除细胞碎片。通常培养数天后,细胞状态会逐渐稳定下来。


KYSE-30细胞收货时

KYSE-30细胞收货时

观察到细胞碎片

KYSE-30细胞继续

▲ KYSE-30细胞继续

培养后细胞碎片减少

(图片由客户提供,仅供学习参考)


小贴士:遇到小黑点问题时,首先要排除微生物污染,再按以上办法解决哦~


细胞碎片/分泌物和微生物污染的区别


_

细胞碎片/分泌物

微生物污染

形态

大小不一的黑色圆点,不规则形状

圆球状或杆状,

形态非常规则

是否运动

原地震动,布朗运动

或相对液体静止

快速游动,快速转圈或

相对液体静止

分布情况

视野中分布无规律

视野中分布均匀

增长情况

无抗生素条件下

不增多或缓慢增多

无抗生素条件下

48-72小时内爆发式增多



   


细胞碎片

(由客户提供,仅供学习参考)




   


微生物污染

(由客户提供,仅供学习参考)


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