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细胞学堂 | Caco-2细胞生长特性和常见问题解决策略

来源:Procell  浏览量:  发布时间:2021-12-09 13:22:46

Caco-2 (人结直肠腺癌细胞)分离自一位72岁男性直肠原位癌,人结肠癌Caco-2细胞系在标准培养条件下汇合后,自发分化为肠上皮样细胞,是常用的肠癌细胞模型。


本文为大家介绍Caco-2细胞生长特性和常见问题解决策略。


生长特性

    呈岛状生长


Caco-2细胞群的边界光滑,视野中一个个细胞克隆如同海上小岛一般。

Caco-2细胞呈岛状生长

空泡多


Caco-2细胞群中常常含有巨大的空泡,这是细胞本身的特性,属于正常现象。

Caco-2细胞空泡

难消化


Caco-2细胞与细胞间连接紧密,使得细胞难以解离。通常加入胰酶后,细胞克隆的四周先飘起来,中间仍贴壁;随后整片克隆脱落,但细胞与细胞间不会分散。消化时间为5-10分钟,该细胞难以被吹散为单个细胞,当细胞能够被吹散为小的细胞团块,即可终止消化。


贴壁慢


Caco-2贴壁缓慢,在标准培养条件【MEM(含NEAA)+20% FBS+1% P/S】下,接种后约24~72小时完成贴壁。推荐接种后第三天再换液。


生长慢


Caco-2细胞传代周期较长,这是因为Caco-2贴壁和生长都较为缓慢。按1:4传代的情况下,约一周传代一次。


常见问题


细胞不贴壁怎么办?


Caco-2细胞培养基里添加的胎牛血清比例为20%,当血清比例降低,贴壁性下降时,补充胎牛血清至20%,继续培养1-2天,细胞即可贴壁。检查培养基是否偏碱(呈紫红色),偏碱的培养基可能导致细胞无法贴壁。


能否用DMEM培养基替代MEM培养基?


可以。DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium)是在MEM培养基的基础上研制的。Caco-2细胞在DMEM+20%FBS+1%P/S条件下生长状态正常。


MEM中不含NEAA会怎样?


当使用不含NEAA的MEM培养基时,Caco-2生长速度可能下降,漂浮细胞增多。


细胞消化不下来怎么办?


如果消化5-10分钟,细胞部分脱落,另一部分仍然贴壁紧密,可以将脱落细胞转移至离心管,向原瓶中加入新的胰酶,放入培养箱继续消化剩余细胞,每隔1min拿出来观察,直到细胞滑落。


漂浮细胞多怎么办?


有少量发亮的细胞漂浮或黏附在细胞克隆上,是正常的,随后会进入克隆并正常生长。所以避免频繁观察细胞,可以减少漂浮细胞产生。

如果Caco-2细胞随着培养过程,漂浮得越来越严重,甚至大块儿飘起,就要检查培养基成分、培养环境是否出现异常了。


注意事项

01

Caco-2细胞贴壁慢特别是刚复苏时,一般2-3天贴壁    展开,会有空泡。

02

Caco-2细胞在传代细胞中,注意消化散,否则难以贴壁。

03

成团生长,Caco-2细胞密度越大,表面空泡黑点越多。

04

一般Caco-2细胞长至80%传代,细胞成片,其实密度很大。

05

Caco-2细胞生长太满对细胞状态影响严重,传代后易碎,死亡。

06

Caco-2细胞生长时间越长,消化时间越长。


基本资料



细胞名称

Caco-2 (人结直肠腺癌细胞)

细胞别称

CaCo-2; CACO-2; Caco 2; 

CACO 2; CACO2; CaCo2; CaCO2;

 Caco2; Caco-2/ATCC

组织来源

男;72岁;结肠,结直肠腺癌

生长特性

贴壁细胞

细胞形态

上皮细胞样

生长培养基

MEM+20% FBS+1% P/S

推荐传代比例

1:3-1:4

推荐换液频率

48-72小时/次

冻存液

55% MEM+40%FBS+5%DMSO



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