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细胞学堂 | HK-2细胞培养常见问题攻略

来源:Procell  浏览量:  发布时间:2021-12-27 09:08:21

建系背景


人肾皮质近曲小管上皮细胞系HK2,取自正常成人肾脏的永生化近端小管上皮,通过转入HPV-16 E6/E7基因构建而成,并在无血清培养基中持续生长了一年多。HK-2的生长依赖于表皮生长因子EGF,保留了良好的PTCs的表型。


阳性表达:碱性磷酸酶;γ-谷氨酰转肽酶;亮氨酸氨肽酶;酸性磷酸酶;细胞角蛋白; α3β1 整合素;纤连蛋白。


阴性表达:因子VIII 相关抗原、6.19 抗原和 CALLA 内肽酶呈阴性。


常见问题


在培养HK2细胞的时候,常会出现一些细节问题,不可掉以轻心。本文为大家总结培养HK2细胞常见的问题,以及解决方案。


出现空泡

01


空泡问题需要结合生长速度和形态来看:如果生长速度和形态正常,空泡可能是正常的细胞活动,传代后空泡即可减轻。


如果生长较慢,形态异常,空泡可能是自噬行为,可加大血清比例(不超过20%)或更换血清品牌改善细胞状态。


HK-2细胞


出现拉丝

02


细胞伸出细长的丝有两种情况:


第一种情况是HK2细胞迁移造成的,HK2细胞在培养皿上并不是静态的,也会出现迁移。迁移时HK2细胞的一部分滞留在原处,迁移的过程中会拉出一条细长的丝。这种情况下拉丝的细胞占少数,细胞整体的生长状态是正常的,不用特殊处理。


第二种情况是营养不良,拉丝的细胞占大多数,同时细胞生长缓慢,此时可以提高血清比例(不超过20%)或添加5 ng/mL EGF。


形态不对

03


正常的HK2呈铺路石状生长,如果HK2细胞呈镰刀状或不规则状(如下图),可能是因为培养环境发生了较大的改变,比如从有血清到无血清的转换,此时换回原来的培养条件细胞可逐渐恢复;如果细胞变得细长,这时候可能是营养不良。

HK2细胞呈镰刀状或不规则状


生长缓慢

04


在普诺赛标准培养条件(MEM+10%FBS+1%PS),以及1:3传代条件下,HK2细胞的传代周期约为3天。


当细胞生长缓慢,一周无法传代时,需要考虑培养基特别是血清是否合适。


选择合适的培养基及血清,同时加大细胞接种密度可以改善。


培养基选择


HK-2最初建系使用无血清培养,众多文献以及实践证明MEM、DMEM或DMEM/F12添加10%胎牛血清的条件下,HK2细胞也能良好生长。


胎牛血清的质量是关键,胎牛血清品质越高,HK-2状态越好。


若使用无血清培养基培养,需要使用多聚赖氨酸或者明胶包被培养瓶,以促使贴壁。


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