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细胞学堂 | 骨髓来源树突状细胞(DC细胞)怎么养

来源:Pricella  浏览量:  发布时间:2022-02-22 11:02:49

树突状细胞(dendriticcells, DC)因其表面具有伪足样或树枝状突起而得名,它是体内最广泛的专职抗原递呈细胞( antigen presenting cells,APC) , 具有强大的激活初始T细胞, 激发初次免疫应答的独特功效。


DC细胞在体内含量甚微, 这极大地限制了DC的研究和应用。但DC能从不同组织里的DC前体细胞分化、诱导而来, 如骨髓、外周血、脐血中培养出来。


DC不仅能诱导免疫反应, 还具有诱导免疫耐受的特性。根据发育成熟状态,将DC分为未成熟DC (immatureDC, im-DC)、成熟DC (matureDC, mDC)和半成熟DC(semi-matureDC, smDC) 。DC表达特异性表面标志OX62, 高表达MHCII、CD80、CD86。成熟的DC具有明显刺激同种异体T细胞增殖的能力。 


本文所述内容,适用于小鼠骨髓来源树突状细胞(DC细胞)大鼠骨髓来源树突状细胞(DC细胞)


提取方法

取大腿,冲洗骨髓,得到骨髓细胞悬液, 经密度梯度离心得到骨髓单个核细胞。


诱导方法

应用重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、重组白细胞介素-4 (IL-4)诱导,可以得到未成熟的DC细胞, 再加入重组肿瘤坏死因子-α(TNF-α) 进行体外诱导培养,可以得到成熟的DC细胞。


标准形态

成熟的DC细胞形态多样细胞表面伸出树枝样突起, 形态不规则,长短及粗细不一, 细胞形态有的呈叶状, 有的呈星状, 细胞大而透亮。


小鼠骨髓来源树突状细胞(DC细胞)(100X)
小鼠骨髓来源树突状细胞(DC细胞)(100X)

小鼠骨髓来源树突状细胞(DC细胞)(100X)


小鼠骨髓来源树突状细胞(DC细胞)(200X)
小鼠骨髓来源树突状细胞(DC细胞)(200X)

小鼠骨髓来源树突状细胞(DC细胞)(200X)


培养注意事项 

DC的培养时间较长, DC逐渐由贴壁生长变成半悬浮, 悬浮状态生长。当DC开始半悬浮及悬浮生长后, 换液时吸走的培养液中会带走一定量的DC, 可将其离心后,再置于培养液中继续培养, 避免DC的损失浪费。


DC细胞为不增殖细胞群,建议收货一周内做实验为最佳。


收货处理方法

收到细胞后,请按照以下方法进行操作:


01

取出T25细胞培养瓶,用75%酒精消毒瓶身;

02

拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h,以稳定细胞状态。

03

将T25细胞培养瓶中的培养基吸出转移至50ml离心管中,经1200-1500rpm离心3min,弃上清,收集细胞沉淀;

04

用新鲜培养基轻轻吹打混匀细胞沉淀,转入原瓶中继续培养,procell寄送的培养瓶使用的是不透气瓶盖,需要拧松瓶盖让细胞透气。

05

DC细胞为不增殖细胞群,如果您的实验还未准备好,建议您每3天换液一次即可,换液时注意将旧培养基离心收集细胞后放回原瓶继续培养。

06

普诺赛建议您收货后一周内做实验,避免细胞培养时间过长影响状态以及后续试验结果。


半贴壁半悬浮细胞消化处理方法

如您的细胞在做实验前需要消化后转移到孔板或者其他器皿,可按照如下操作进行:


01

吸出旧培养基转移至离心管中,用PBS冲洗2遍,将冲洗的PBS也转入离心管中一起离心,经1200-1500rpm离心3min,弃上清,收集细胞沉淀①;

02

添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中,轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃温浴1-3min;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后,再加入5ml完全培养基终止消化; 

03

用吸管轻轻吹打混匀,收集细胞悬液至离心管中;经1200-1500rpm离心3min,弃上清,收集细胞沉淀②; 

04

吸取5ml新鲜完全培养基,重悬细胞沉淀①、细胞沉淀②,把①、②混匀;

05

用吸管轻轻吹打混匀、分散细胞,按实验需求接种于实验器皿内(按实验需求),然后补充适量新鲜的完全培养基,置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;

06

待细胞状态稳定后,用于实验;可以每2-3天换液一次新鲜的完全培养基。

07

普诺赛建议您收货后一周内做实验,避免细胞培养时间过长影响状态以及后续试验结果。


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