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细胞学堂 | 有限传代细胞代次管理秘籍

来源:Pricella  浏览量:  发布时间:2022-03-08 09:55:35

本期将主讲有限传代细胞,及其代次管理方法。快来查收吧!

如有疑惑,请在文末留言。


#常见的有限传代细胞


有限传代细胞属于二倍体细胞,它的核型相对稳定,与生物体细胞特性更加相似,其对代次要求也更高。因有限传代细胞的分裂存在一个极限,所以在达到该极限值后,细胞将不再继续分裂,并会导致衰老、死亡,不能进行无限增殖。

常见有限传代细胞如表1所示:

货号

名称

中文名称

理论

代次

CL-0161

MRC-5

人胚肺细胞

~60

CL-0243

WI-38

人胚肺细胞

~60

CL-0106

HFL1

人胚肺成纤维细胞

~60

CL-0538

IMR-90

人胚肺成纤维细胞

~60

CL-0657

PUMC-HUVEC-T1

SV40T转化

人脐静脉内皮细胞

~60

CL-0056

CCD-1095Sk

人乳腺浸润性

导管癌旁皮肤细胞

~10


表1. 常见有限传代细胞


注意:

有限传代细胞应在细胞理论代次前2/3使用(如MRC-5,一般40代前状态较好)。


#为什么细胞有传代限制


1965年,微生物学家Leonard Hayflick提出海夫利克极限,该实验中发现了人体细胞分裂次数上限为“56”, 被认为是机体衰老的原因。

1975年,Elizabeth H.Blackburn等人发现端粒,其由简单的DNA高度重复序列组成,保证每条染色体的完整性,而端粒的长度反映了细胞复制史及复制潜能。

正是因为端粒限制着细胞分裂次数,所以传代培养的细胞有了传代限制。同时,对于不同物种细胞体外培养代次也有所不同,如表2所示

动物

细胞群体倍增次数

90~120

40~60

小鼠

14~28


表2. 体外培养的胚胎成纤维细胞的平均培养代数


以上就是有限传代细胞的基本信息。接下来,我们讲一下它的代次管理


#为什么要进行代次管理


细胞状态

有限传代细胞会衰老,其细胞形态特征和生长速度等会发生变化。

 遗传特性

有限传代细胞随着传代次数的增多,在传代过程易产生遗传漂变,基因/蛋白表达发生变化。

细胞库管理

细胞库管理属于细胞库分级管理标准之一,而代次管理属于细胞库管理内容之一。


#代次计算


对于有限传代细胞代次的计算,我们可以采用记录细胞群体倍增数(PDL)的方法。

公式如下:

PDL =X+3.322(log Y – log I)

X为传代前代次,I 为细胞接种前细胞数,Y 为培养后细胞总数。

注意:

1. 常规培养时,1:2传代代次+1,1:3传代代次+1.5;

2. 扩增培养记录接种细胞量以及收获细胞量,根据公式计算代次。


#细胞代次管理


细胞的代次管理,共有以下三个步骤:

细胞引进

当我们得到一个新的细胞,就要记录该细胞的初始代次。

扩增培养

对细胞进行扩增培养时,可以根据传代过程记录代次。

分级冻存

在进行细胞冻存时,可以根据不同级别冻存库,对细胞代次进行控制。

注意:

1. 常规培养时按照1:2传代,记录每次传代后代次;

2. 冻存细胞根据细胞数量计算细胞代次,最后冻存的批次进行传代数检测。


#有限传代细胞传代测试


在进行细胞复苏后,以一定密度接种至孔板培养,每次密度达到80%传代,需记录传代次数及传代间隔。(要求:在预计传代次数内,细胞形态无明显差异,传代时机间隔无明显变化。

如测试后未达到预期传代数,可进行细胞衰老检测。


细胞衰老检测方法

在进行检测时,我们常用到细胞衰老β-半乳糖苷酶检测试剂盒。细胞在PH值为6时,β-半乳糖苷酶阳性率随代龄增加而逐渐上调。衰老细胞/组织产生的β-半乳糖苷酶可以催化底物X-Gal生成蓝色产物(如下图所示)。

细胞染色效果图

图3. 细胞染色效果图

注意:

限制库存的有限传代细胞系代次以保证库存细胞质量,达到一定代次后,细胞自身的状态都会开始不断变差,不符合实验要求。用有限传代细胞系实验时需要做好使用规划和代次管理,确保实验的正常使用。


温馨提醒:

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