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细胞学堂 | 有限传代细胞代次管理秘籍
来源：Pricella 浏览量： 发布时间：2022-03-08 09:55:35
本期将主讲有限传代细胞，及其代次管理方法。快来查收吧！
如有疑惑，请在文末留言。
#常见的有限传代细胞
有限传代细胞属于二倍体细胞，它的核型相对稳定，与生物体细胞特性更加相似，其对代次要求也更高。因有限传代细胞的分裂存在一个极限，所以在达到该极限值后，细胞将不再继续分裂，并会导致衰老、死亡，不能进行无限增殖。
常见有限传代细胞如表1所示：
货号 | 名称 | 中文名称 | 理论 代次 |
CL-0161 | 人胚肺细胞 | ~60 | |
CL-0243 | 人胚肺细胞 | ~60 | |
CL-0106 | 人胚肺成纤维细胞 | ~60 | |
CL-0538 | 人胚肺成纤维细胞 | ~60 | |
CL-0657 | SV40T转化 人脐静脉内皮细胞 | ~60 | |
CL-0056 | 人乳腺浸润性 导管癌旁皮肤细胞 | ~10 |
表1. 常见有限传代细胞
注意：
有限传代细胞应在细胞理论代次前2/3使用（如MRC-5，一般40代前状态较好）。
#为什么细胞有传代限制
1965年，微生物学家Leonard Hayflick提出海夫利克极限，该实验中发现了人体细胞分裂次数上限为“56”， 被认为是机体衰老的原因。
1975年，Elizabeth H.Blackburn等人发现端粒，其由简单的DNA高度重复序列组成，保证每条染色体的完整性，而端粒的长度反映了细胞复制史及复制潜能。
正是因为端粒限制着细胞分裂次数，所以传代培养的细胞有了传代限制。同时，对于不同物种细胞体外培养代次也有所不同，如表2所示。
动物 | 细胞群体倍增次数 |
龟 | 90~120 |
人 | 40~60 |
小鼠 | 14~28 |
表2. 体外培养的胚胎成纤维细胞的平均培养代数
以上就是有限传代细胞的基本信息。接下来，我们讲一下它的代次管理！
#为什么要进行代次管理
细胞状态
有限传代细胞会衰老，其细胞形态特征和生长速度等会发生变化。
遗传特性
有限传代细胞随着传代次数的增多，在传代过程易产生遗传漂变，基因/蛋白表达发生变化。
细胞库管理
细胞库管理属于细胞库分级管理标准之一，而代次管理属于细胞库管理内容之一。
#代次计算
对于有限传代细胞代次的计算，我们可以采用记录细胞群体倍增数（PDL）的方法。
公式如下：
PDL =X+3.322(log Y – log I)
X为传代前代次，I 为细胞接种前细胞数，Y 为培养后细胞总数。
注意：
1. 常规培养时，1:2传代代次+1，1:3传代代次+1.5；
2. 扩增培养记录接种细胞量以及收获细胞量，根据公式计算代次。
#细胞代次管理
细胞的代次管理，共有以下三个步骤：
细胞引进
当我们得到一个新的细胞，就要记录该细胞的初始代次。
扩增培养
对细胞进行扩增培养时，可以根据传代过程记录代次。
分级冻存
在进行细胞冻存时，可以根据不同级别冻存库，对细胞代次进行控制。
注意：
1. 常规培养时按照1:2传代，记录每次传代后代次；
2. 冻存细胞根据细胞数量计算细胞代次，最后冻存的批次进行传代数检测。
#有限传代细胞传代测试
在进行细胞复苏后，以一定密度接种至孔板培养，每次密度达到80%传代，需记录传代次数及传代间隔。（要求：在预计传代次数内，细胞形态无明显差异，传代时机间隔无明显变化。）
如测试后未达到预期传代数，可进行细胞衰老检测。
细胞衰老检测方法
在进行检测时，我们常用到细胞衰老β-半乳糖苷酶检测试剂盒。细胞在PH值为6时，β-半乳糖苷酶阳性率随代龄增加而逐渐上调。衰老细胞/组织产生的β-半乳糖苷酶可以催化底物X-Gal生成蓝色产物（如下图所示）。
图3. 细胞染色效果图
注意：
限制库存的有限传代细胞系代次以保证库存细胞质量，达到一定代次后，细胞自身的状态都会开始不断变差，不符合实验要求。用有限传代细胞系实验时需要做好使用规划和代次管理，确保实验的正常使用。
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