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细胞学堂 | 如何将H9c2(2-1)养得更好?

来源:Pricella  浏览量:  发布时间:2022-03-15 14:59:07

H9c2(2-1)(大鼠心肌细胞)是由胚胎BD1X大鼠心脏组织衍生的原始克隆细胞系的亚克隆,并表现出骨骼肌的许多特性。该细胞中的成肌细胞能融合形成多核的肌管,并对乙酰胆碱的刺激发生反应。如果培养基中的血清浓度下降到1%,H9c2(2-1)细胞融合会发生得很快。该细胞系是检测细胞发育的有效模型系统[1]


本期为大家总结了,在培养H9c2(2-1)细胞过程中,特别需要注意的地


细胞复苏


溶解细胞过程要迅速;已溶解的冻存细胞不能在常温下存放太久,需要尽快离心去除DMSO。


细胞冻存


推荐配比:55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO的冻存液;

细胞冻存时,尽量吹散细胞,注意控制吹打力度


细胞培养


H9c2(2-1)细胞为贴壁细胞,正常细胞形态为梭形。 


H9c2(2-1)细胞正常形态


图1. H9c2(2-1)细胞正常形态



培养条件

培养基:DMEM+10% FBS+1% P/S

推荐传代比例:1:2-1:4

推荐换液频率:2~3次/周

培养箱:37℃,5% CO2



传代操作

去掉培养皿中的培养基,加入PBS进行冲洗,并去上清;

加入0.25%胰酶进行润洗,并去上清;

放入CO2培养箱消化2-4min;

加入完全培养基终止消化,并吹打均匀。



常见问题及解答

为什么会出现细胞表面颗粒较多的现象?

可能是培养环境有问题,可以改用DMEM/F-12培养基培养,传三代后会恢复平整细胞表面。

为什么会出现空泡?

可能是铺板时铺得不够均匀,局部过于密集,密集地方的细胞就开始状态变差、空泡增多。也可能是血清差,需要更换优质血清,及时换液。

为什么细胞长得慢?

可能是细胞接种得太少,细胞密度太低。可以先培养,然后消化重新铺瓶,提高密度培养。

为什么细胞状态变差,容易漂?

可能是血清问题,建议换血清,并注意血清要程序解冻,不能水浴化开;也有可能是细胞生长密集,需要及时传代,并不是细胞长满才传代,当有个别地方长得过于密集,容易叠加的时候应该就要传代了。



注意

在培养过程中,保持细胞汇合度30%~90%;

每一步操作都要轻柔小心,以免细胞受损;

选用优质培养基,减少有害物质对细胞的刺激。


参考文献

[1] Kimes BW,Brandt BL.Properties of a clonal muscle cell line from rat heart.Exp Cell Res.1976 Mar 15;98(2):367-81.


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