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细胞学堂 | 培养K7M2-WT细胞,千万不要错过这些知识

来源:Pricella  浏览量:  发布时间:2022-04-08 10:20:02

K7M2-WT(小鼠骨肉瘤成骨细胞)在Balb/c小鼠中形成肿瘤,在超过90%的接种小鼠中自发转移到肺部K7M2-WT细胞抗原表达:Ⅷ因子、整合唾液酸蛋白(BSP)、二聚糖、饰胶蛋白聚糖、绒毛蛋白。此外,骨唾液酸蛋白、二聚糖、饰胶蛋白聚糖和骨调素的表达显示K7M2-WT细胞骨家族细胞特性。


基础信息

生长培养基

DMEM10% FBS1% P/S

推荐传代比例

1:3-1:4

推荐换液频率

2~3次/周

倍增时间

~31小时

细胞形态

成骨细胞样

生长特性

贴壁细胞

冻存条件

55% 基础培养+40%FBS+5%DMSO

培养条件

气相:空气,95%;CO2,5%

温度:37℃


细胞复苏

01

将水浴锅预热至37℃,准备好干净的一次性手套,将细胞从液氮罐中取出,放入一次性手套中,迅速没入水浴锅,摇晃冻存管加速溶解,以一分钟内全部溶解为宜


02

将解冻的细胞放入装有新鲜培养基的离心管中,打开盖子前,用75%酒精擦拭冻存管外部;

03

1200rpm离心3分钟左右,离心完毕后去掉上清;

04

取适量与细胞配套的完全培养基重悬细胞,并接入到无菌容器中,补充一定量培养基,再放入培养箱培养。


细胞冻存

01

配置冻存液。由于DMSO配置时会发热,一定要等冻存液冷却后再使用,避免灼伤细胞;

02

细胞消化好后用新鲜培养基终止,制成细胞悬液,1200rpm离心3分钟左右,尽量吸尽上清;

03

加入配置好的冻存液,调节浓度至大约1×106个细胞/mL,分装到细胞冻存管;

04

分装好的冻存液转入程序冻存盒,放入-80℃冰箱过夜;

05

从-80℃冰箱取出冻存管,并迅速转移到液氮长期保存。


细胞传代

1

将培养基吸出丢弃,加入2mL PBS润洗;

2

吸出PBS丢弃,加入2mL胰酶润

3

放入培养箱消化2-3分钟,轻拍培养皿侧壁,看到细胞脱壁且聚集的细胞团松散开后,加入2mL完全培养基终止消化;

4

将细胞轻柔吹打,使细胞混匀为悬浮液,根据需求进行接种。

小贴士

细胞密度不能太低;

润洗时要注意将所有细胞都浸润到。

K7M2-WT细胞正常生长
K7M2-WT细胞正常生长

图1. K7M2-WT细胞正常生长


培养注意事项

1

该细胞对外界刺激较为敏感,建议使用新鲜的DMEM高糖培养基,培养基出现发紫现象时不建议继续使用,且及时更换新鲜培养基;

2

该细胞贴壁不牢,会有部分细胞悬浮。换液时勿用PBS进行冲洗,悬浮细胞过多时可离心收集再放回原培养瓶;

3

该细胞传代时请注意消化程度,请勿消化过度


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