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细胞学堂 | MKN-7细胞培养攻略

来源:Pricella  浏览量:  发布时间:2022-05-17 13:23:56

# MKN-7细胞基础信息 #


01

细胞培养条件

RPMI-1640 (PM150110)+10% FBS (164210-500)+1% P/S (PB180120)


02

生长特性

上皮样,贴壁细胞


03

传代方式

用含EDTA的0.25%胰蛋白酶消化7~10min,推荐传代比例1: 2


# 冻存和复苏 #


冻存

建议冻存密度比普通细胞略高如期望复苏后可以铺满6cm的培养皿,则需冻存的细胞量为培养皿铺满时的1.5倍。

请使用优质冻存液。如果是自己配置的程序冻存液,可以适当提高血清含量。推荐冻存密度1~5×10^6 cell/mL。


复苏

建议使用T25瓶或者6cm的培养皿进行培养。如果复苏前期细胞形态多样,可进行暂时换液处理,待细胞铺满再传代;如需扩增,需等细胞较密集时再传代。


# MKN-7培养注意事项 #


1

MKN-7生长速度很慢

 倍增时间约3天左右,正常培养5~7天可传代一次;

2

贴壁形态展开较大

 消化之后一瓶细胞量比较少,传代时的比例建议1:2,冻存时1瓶细胞只能冻一管;

3

折光度较低

 在显微镜下观察时,轮廓有时不清晰,观察时显微镜亮度请勿太高,否则可能看不到细胞边界;

4

较难消化

 常规的消化方法难以把控,加入培养基后细胞会迅速贴壁。建议使用浸泡消化,使用胰酶完全浸润细胞,直接放入37℃ 的环境中进行消化,消化时间一般在7~10分钟

 待部分细胞脱壁漂起后,镜下观察,大部分细胞有脱壁迹象后加入适量胰酶,轻轻吹打,将细胞吹落、吹散,随后吸出器皿,加入培养基终止消化,离心收集。

 若还有少量细胞无法轻轻吹下,则在吸出脱落细胞后,加入胰酶继续消化再收集。

小贴士:使用这种消化方法,可能会造成一定的细胞损失。


MKN-7细胞生长图

图:MKN-7生长图片



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