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细胞学堂 | 3T3-L1细胞培养及成脂诱导攻略详解

来源:Pricella  浏览量:  发布时间:2022-05-23 15:20:25

3T3-L1 (小鼠胚胎成纤维细胞)是通过克隆分离得到的3T3(swiss小白鼠)的连续亚株。当3T3-L1细胞从快速分裂到长满接触抑制时,该细胞经过前脂肪向脂肪样逆转。3T3-L1细胞可用于研究糖尿病,肥胖症等。

本期细胞学堂,普诺赛将为大家带来3T3-L1细胞基础信息、培养注意事项、诱导分化过程及注意事项。

01

基础信息


生长特性

贴壁细胞  

细胞形态

成纤维细胞样

推荐传代比例

1:3-1:4

推荐换液频率

2~3次/周

生长培养基

DMEM+10%CS+1% P/S

冻存条件

冻存液:55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO

温度:液氮

培养条件

气相:空气,95%;CO2,5%

温度:37℃


02

培养注意事项


1

培养密度一般控制在40-60%的汇合度,过高的汇合度,细胞可能会开始分化;

2

注意血清类型。一般使用的是新生牛血清培养,用胎牛血清生长速度会加快 ,容易使细胞分化;

3

传代时铺板需均匀,不然会导致分化不均匀,分化比例低。


培养好3T3-L1细胞后,就可以开始准备成脂诱导了。我们先来了解一下成脂分化是一个怎样的过程:

前脂肪细胞是一类同时具有增殖和分化为成熟脂肪细胞能力的前体细胞,此种前体细胞在不同的生长因子、激素等物质的作用下,经历有丝分裂克隆期、生长停滞期、进一步的克隆期、终末分化四个阶段,细胞本身的成纤维状态发生改变,通过胞质内甘油三脂聚集形成成熟脂肪细胞。诱导完成后,经油红O染色,就可以在镜下观察到甘油三脂脂肪滴的生成。


03

诱导分化过程


01

3T3-L1细胞长满以后,接触抑制2天(目的是让细胞退出生长周期);

3T3-L1细胞接触抑制

图1. 细胞接触抑制

02

加入含有IBMX(使用浓度为0.5mM)、地塞米松(使用浓度为1μmol/L)、胰岛素(使用浓度为1-10μg/mL)的培养液培养2天;

加诱导培养基1培养

图2. 加诱导培养基1培养

03

再换成只含胰岛素的培养基培养2天;

加诱导培养基2培养

图3. 加诱导培养基2培养

04

最后换成不含诱导激素的常规培养基培养,每2天换液1次;

3T3-L1细胞常规培养

图4. 常规培养

05

用油红O染色法鉴定细胞是否诱导成功。




小贴士

● 从添加诱导剂开始到分化结束,通常需要8天。一般第6天脂滴就出来了,剩下2天就是脂滴积聚的过程。分化效果好的话,第4天脂滴就出来了;

● 3T3-L1细胞添加诱导剂时,手法要特别轻,尽量用枪头贴壁逐滴加入,让液体慢慢流下,这样对细胞的冲击最小,否则极容易造成细胞卷边飘起;

● 细胞代数越多,成脂能力越弱,需要诱导的时间也就越长,可适当增加地塞米松和胰岛素用量;

● 实验中所使用的溶剂遵循现用现配的原则。


参考文献

[1] Zebisch K ,  Voigt V ,  Wabitsch M , et al. Protocol for effective differentiation of 3T3-L1 cells to adipocytes[J]. Analytical Biochemistry, 2012, 425(1):88-90.

[2] 张晓琴. 优化3T3L1细胞成脂诱导模型并初步探讨miR-222-3p对脂肪生成的作用[D]. 湖北中医药大学, 2020.

[3] 王友升, 田元元, 蔡琦玮. 前体脂肪细胞3T3-L1诱导分化条件的优化[J]. 食品科学技术学报, 2014, 32(3):5.


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