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细胞学堂 | 不贴壁、容易漂?TM3、TM4细胞培养诀窍盘点

来源:Pricella  浏览量:  发布时间:2022-06-14 11:01:08

TM3、TM4来源于小鼠睾丸组织,其培养条件基本相同,细胞特性却有所不同。

TM3 (小鼠睾丸间质细胞) 在LH作用下cAMP产量升高,但对促卵泡激素没有响应;在LH存在下,TM3细胞可以代谢胆固醇。TM3细胞对LH的响应持续时间与血清批次有关。

TM4 (正常小鼠睾丸Sertoli细胞) 在FSH的作用下cAMP产量增加,但对LH无反应;TM4细胞与原代Sertoli细胞相比,对FSH的反应性降低。TM4细胞组成性纤溶酶原激活物的产量很低,但可被FSH刺激产生,受维甲酸刺激可有大幅增高。TM4细胞可产生视黄醇结合蛋白、组织纤溶酶原激活物和转铁蛋白;TM4细胞表达FSH受体、雄激素受体和孕激素受体;鼠痘病毒阴性。



基础信息

生长特性:贴壁细胞

细胞形态:上皮细胞样

生长培养基:DMEM/F125% HS(164215)2.5% FBS1% P/S

推荐传代比例:1:3-1:4

推荐换液频率2~3次/周

冻存条件:55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO

培养条件:

气相:空气,95%;CO2,5%

温度:37℃


TM3细胞正常生长图片

图1. TM3正常生长图片


 TM4细胞正常生长图片

图2. TM4正常生长图片

TM3、TM4细胞贴壁松散,再加上运输刺激,到货时,可能会出现细胞脱壁漂浮的现象。遇到这种情况应该怎么办呢?

如果TM3、TM4到货时发现有大块脱落的细胞团,不要着急,按照以下步骤进行处理后,细胞即可正常生长:

1

将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管,离心收集细胞(1200rpm 3min);

2

去掉上清,用PBS重悬细胞,将细胞收集到一个离心管中,PBS震动离心管混匀即可,再次离心(1200rpm 3min);

3

去掉上清,加入1mL左右0.25%胰酶重悬混匀细胞,震动离心管混匀即可,不能吹打,放入培养箱消化细胞;

4

消化2-3min后,用移液枪轻轻吹打细胞悬液,使细胞团分散。加入5mL含血清的培养基混匀后终止消化,离心(1200rpm 3min);

5

去掉上清,加入5mL左右的专用完全培养基混匀,接种于无菌容器中。


小贴士:

这时候,可在显微镜下观察TM3、TM4细胞是否成均匀分散的单颗细胞,若还有 3-5 个成团的小细胞团,可不用重新消化,使之贴壁且生长稳定后再消散细胞。


将细胞按照以上步骤处理后,第二天基本上都会重新贴壁。

完美解决细胞收货问题,只是养好TM3、TM4细胞的其中一个环节。在培养细胞过程中,还有许多细节,是需要重视的。




● 培养过程中,动作一定要轻柔;

消化1~2min后,在显微镜下看到细胞块中间的细胞明显分离变圆,即可终止,全程不要拍打培养瓶;

TM3、TM4细胞生长快速,贴壁松散,细胞长满后会成片飘起,注意及时传代;

传代第二天可能会有聚团现象,第三天可自行展开;

传代密度不可过高,至少预留2天的生长时间;

换液时需预热培养基。





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