本司产品仅用于科研,不用于临床诊断和治疗

全国免费热线:400-999-2100

您身边的细胞培养专家!

所有分类
  • 所有分类
  • 细胞系
  • 原代细胞
  • 血清
  • 细胞培养基
  • 辅助试剂
  • 细胞凋亡检测试剂盒
  • 细胞房除菌产品
热搜: 胎牛血清 VERO RAW264.7 成纤维细胞 间充质干细胞 上皮细胞

忘记密码

个人邮箱:
验证码: captcha

账号激活

个人邮箱:
×
当前位置:首页 >> 技术支持 >> 实验指南 >> 详细内容

技术支持Technical Support

联系我们CONTACT US

细胞学堂 | C2C12细胞培养攻略,C2C12细胞诱导分化步骤

来源:Pricella  浏览量:  发布时间:2022-06-20 13:59:35


C2C12 (小鼠成肌细胞)是由D·Yaffe和O·Saxel建立的小鼠成肌细胞株的亚克隆。C2C12细胞分化很快,容易形成可伸缩的肌管并生成特征性的肌蛋白。用骨形成蛋白2(BMP-2)处理C2C12细胞,会导致C2C12细胞的分化途径从成肌细胞转换为成骨细胞。

C2C12作为研究肌肉理想的细胞模型,在实验研究中常诱导其分化为多核肌管。成肌分化在肌肉再生中起重要作用,它是通过一种高度协调的序列程序来产生成熟的骨骼肌的过程。


基础信息

生长特性:贴壁细胞

细胞形态:成肌细胞样

生长培养基DMEM10% FBS1% P/S

推荐传代比例:1:3-1:4

推荐换液频率:2~3次/周

倍增时间:~20小时

冻存条件:   

冻存液:55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO

温度:液氮

培养条件:   

气相:空气,95%;CO2,5%

温度:37℃

C2C12细胞正常生长

图1. C2C12细胞正常生长



C2C12细胞状态直接影响着分化潜力,要想细胞分化做得好,首先要在培养上下功夫。该细胞的换液和传代步骤,参照其他贴壁细胞进行操作即可。除此之外,还有以下三点,需要留意:

1

该细胞生长速度快,容易分化,建议密度达70%时传代;

2

不要让细胞长得太满甚至开始融合,影响后续成肌分化率;

3

细胞消化完全后再吹打混匀,不要用枪头把没有消化好的细胞吹下来,以免细胞成团。


待C2C12细胞生长至汇合度为80%左右时,即可进行诱导分化。具体步骤如下:


01

丢弃旧培养基,用PBS清洗两次;

02

换分化培养基(高糖DMEM+2%~6%马血清+1% P/S)诱导,然后置于CO2恒温培养箱中进行培养;

备注:由于马血清品质不同,建议马血清做2%、4%、6%梯度测试,以确定最佳浓度。

03

每24h换液一次,在显微镜下观察细胞形态和生长状况。诱导分化成功时,可以看见肌管表现为厚的管状结构,有时为多核。

C2C12细胞分化

图2. C2C12细胞分化



小贴士

C2C12细胞代数不要太高;

 若加入分化培养基后,细胞仍然继续生长,可用吉姆萨染色验证是否有分化了的肌纤维;

■ C2C12细胞成肌分化过程中会有少量细胞凋亡,属于正常现象。


参考文献

[1]张琳. EPA和DHA对C2C12成肌细胞增殖,分化和凋亡的影响[D]. 武汉轻工大学, 2018.


注:部分图片来源于网络

丁莎/胡文君

丁莎/胡文君

【 上海 】

凌晶

凌晶

【 陕西 】

朱莎莉

朱莎莉

【 湖北、河南 】

刘本佳

刘本佳

【 江苏、安徽 】

章臣雄

章臣雄

【 广东、云南 】

閤春喜

閤春喜

【 四川、甘肃、西藏 】

田博浩

田博浩

【 重庆、吉林 】

石文平

石文平

【 北京、黑龙江、辽宁 】

任施博

任施博

【 江西、福建、新疆、海南 】

李荣枫

李荣枫

【 天津、河北、内蒙古、山西 】

陈雨兰

陈雨兰

【 湖南、山东、宁夏、青海 】

尹国文

尹国文

【浙江、广西、贵州】

微信扫一扫咨询

微信扫一扫咨询

在线客服
关闭
在线咨询
联系销售

关注微信公众号