细胞学堂 | 原代细胞和RAW 264.7诱导破骨细胞攻略！

提取原代细胞，用巨噬细胞集落刺激因子( M-CSF），和核因子KB 受体活化因子配体( RANKL )诱导。

可使用25μg/L M-CSF+50μg/L RANKL的α-MEM完全培养基诱导，隔3天换液一次，培养至第5天开始出现体积较大的破骨细胞。

诱导试剂：可以用LPS诱导，RANKL诱导，或者M-CSF+ RANKL诱导。

1. LPS诱导：10ng/mL、30ng/mL、50ng/mL、100ng/mL LPS均能诱导，但30、50、100ng/mL LPS诱导的多核细胞数量更多，且30ng/mL LPS诱导的多核细胞大小明显增加。

图2. 不同浓度LPS诱导破骨

2. RANKL诱导：用含100μg/L RANKL的α-MEM完全培养基诱导，隔天换液一次，诱导培养至第4~5天出现大量多核细胞。

3. M-CSF+ RANKL诱导: 使用100 ng /mL RANKL 与 100 ng /mL M-CSF的DMEM完全培养基，每两天更新培养液一次，第4天左右开始出现破骨细胞。

原代细胞诱导形成的成熟破骨细胞数量及纯度有限，但骨吸收活性强；RAW264.7细胞系诱导产生的破骨细胞数量多纯度高，但吸收活性弱；

如果培养时，镜下较多细胞出现伪足时，细胞整体状态可能不好，这时的细胞不适合用于诱导破骨；

RAW264.7细胞的传代次数对其能否诱导成破骨细胞至关重要，代数越低，细胞的分化能力越高；

原代细胞诱导培养形成的破骨细胞周期长，一般在9-10天时才达到最佳状态；RAW 264.7诱导培养的周期稍短，一般在第5~6天时出现大量破骨细胞；

除了TRAP染色鉴定破骨细胞，通过观察细胞核的数量以及降钙素受体染色和观察骨（牙）片吸收陷窝，可以进一步鉴定破骨细胞是否具有骨吸收能力。

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