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细胞学堂|血清沉淀是污染吗?如何避免血清沉淀?

来源:Pricella  浏览量:  发布时间:2022-07-20 09:18:16

血清,指血液凝固后,在血浆中除去纤维蛋白原及某些凝血因子后分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白原已被除去的血浆。其主要作用是提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和生长因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞起到某些保护作用。

作为培养细胞的好帮手,血清的品质决定了细胞培养的成败。血清中沉淀太多,不免让人担心影响细胞状态。今天,普诺赛就围绕血清沉淀,逐一解开大家心中的疑惑。

血清沉淀

图1. 血清沉淀


血清沉淀是什么?


在血清解冻后发现浑浊及絮状物质时,不必惊慌,这是正常现象。常见血清的沉淀物有以下几种:

纤维蛋白:可以用肉眼观察到的、较大的沉淀物,可以达到1-2mm;

磷酸钙:常见的一种沉淀物,会造成血清浑浊,并且在37℃培养的时候会增加。这种沉淀物在倒置显微镜下观察像小黑点,并且由于布朗运动看上去像在活动,因此经常被误认为是微生物污染;

其他:胆固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白质。


血清产生沉淀的机理


血清沉淀的形成机理多种多样,具体的机理尚不十分明确。

血清沉淀的多少与血清质量不成正比。如有血清沉淀产生,不必担忧,通常400-600g离心5min,去除大颗粒沉淀,取上清液使用即可

血清不建议过滤后使用,过滤可能会导致血清中部分营养成分的流失。


血清沉淀是污染吗?


前面提到过磷酸钙在倒置显微镜下像小幅振动的小黑点,容易被误认为是微生物污染,但其实血清沉淀并不是污染。由于在37℃的温度下培养,会加剧磷酸钙颗粒产生,故空培血清验证污染的方法也不太直观。

我们可以通过将血清接种在细菌培养基上进行培养,观察是否存在细菌增殖,并且进行革兰氏染色,用油镜观察直接判断是否为微生物污染。


血清沉淀会影响细胞生长吗?


血清出现沉淀是血清的正常特性,各大品牌的血清均有沉淀的出现,根据普诺赛多年细胞培养测试经验,血清沉淀的多少与血清的使用效果没有必然关系。建议更换新批次血清的时候,取少量细胞进行试培养,以确定是否影响后续细胞生长。


如何避免沉淀出现?

正确的解冻方法

1

2℃~8℃解冻;

2

解冻的过程中间断摇匀(隔一段时间轻柔摇匀);

3

室温或者水浴溶解均易造成沉淀增多。

正确使用和保存

1

非必须不用热灭活(热灭活会使血清中部分蛋白质变性析出,影响血清品质);

2

不宜37℃预热,血清和完全培养基通常室温预热即可;

3

避免反复冻融;

4

避免紫外线照射;

5

避免2-8℃长期保存,分装后-20长期保存,按需溶解。

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