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细胞学堂 | 如何用PCR法进行细胞种属鉴定

来源:Pricella  浏览量:  发布时间:2022-08-23 14:00:14


体外培养的动物细胞是目前医学与生命科学领域应用最为广泛、最重要的实验工具之一,确定细胞来源的可靠性以及培养过程中是否存在不同种属间细胞的交叉污染,对于实验成功至关重要。

如果是人源细胞系,并且有文献或数据库公布对应细胞位点信息,即可进行STR鉴定;如果是非人源的细胞系,可以进行种属鉴定,种属鉴定结果判定一般包含两项:是否为单一种属来源细胞以及来源细胞种属,除了必要的种属鉴定外,在使用细胞之前也可针对自身需求对细胞进行相关细胞特性的鉴定,如免疫荧光或流式检测等。部分小鼠细胞也可以做STR鉴定,但目前国际上现有的数据库不完全,很多都没有匹配数据。

目前常见的细胞种属鉴定方法有染色体分析、同工酶分析、DNA条码测序及PCR法。这几种方法中,最常用、最普遍的为PCR法。下面,普诺赛为大家详细介绍PCR法


方法一


提取细胞DNA,利用种属特异性引物序列对细胞DNA进行扩增,之后用电泳检测,分析确定细胞种属及是否存在不同种属细胞交叉污染。

一般来说,引物有很好的特异性时,各引物对仅对同源物种的细胞DNA扩增出目的条带,而对其他种属细胞的DNA无扩增条带;但种属特异性引物序列不是很强时,电泳图中就有可能出现杂带,所以检测时应设置阳性对照,排除非特异性扩增产物的干扰。若在其他泳道出现了对应于其他种属的目的条带,应考虑细胞出现了交叉污染。


640 (1).png

图1. 扩增结果显示样品为小鼠基因,中国仓鼠有非特异性条带扩增(杂带)

方法二

提取细胞DNA,用种属荧光复合引物MIX对动物线粒体COI基因进行扩增,然后用遗传分析仪对扩增产物进行毛细管电泳检测和分析。

这种方法主要通过对应位置出峰来判断是否为该种属。需要注意的是,10-18S位点必须出峰,若未出峰,则表明扩增失败。若细胞出现多峰,则表明为该细胞存在交叉污染。


种属复合扩增MIX表

1-MO

小鼠

11-SS

2-AF

绿猴

13-OA

绵羊

3-OR

穴兔

14-CF

4-RA

大鼠

16-bt

5-HO

19-CR

中国地鼠

10-18S

18S内参


_


_


640.png

图2. 扩增结果显示为绿猴细胞,且无其他种属细胞交叉污染


[1] 韩志玲, 郝鹏, 商晓桂, 等. 7种不同种属来源细胞的PCR检测方法与应用[J]. 畜牧与兽医, 2019.

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