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直播答疑 | 常见细胞增殖检测方法

来源:Pricella  浏览量:  发布时间:2022-09-09 13:31:05

细胞增殖检测实验对于很多老师们来说并不陌生,在8月25日开播的“常见细胞增殖检测方法”课程中,有很多老师就细胞增殖检测提出了疑问。我们筛选出部分代表性问题,并作了详细解答。



01

MTT贴壁细胞要预培养24小时以上吗?

MTT检测中,贴壁细胞需要根据细胞的生长速度来看细胞接种时间,细胞在对数期的时候可以进行干预刺激。


02

怎么确定EdU的孵育时间?

EdU孵育时间由细胞周期决定,一般是细胞周期的1/10-1/5,大部分细胞系可采用孵育2小时的方式,也可以参考有些EdU增殖检测数据库中推荐的细胞孵育时间。


03

请问不更换培养基加CCK-8,有没有影响?

可以不更换培养基加CCK-8,不过加之前最好要观察一下细胞的状态以及密度。


04

原代培养干细胞的时候,怎么判断细胞状态是在增殖还是诱导成其他细胞了呢?

原代细胞培养中,细胞状态的判断,需要结合细胞的形态、细胞的生长速度、细胞纯度等来判断。判断增殖最简单的方法,是看细胞的数量是否增加,至于细胞是否诱导成其他细胞,这个需要通过鉴定,来判断是否变成其他细胞,或者变成其他细胞的比例。


05

毒性或者抑制OD不都是下降的吗?毒性下降的更明显吗?

具体要看检测的方法。如果是MTT或者CCK-8等通过检测活细胞来反映毒性的,OD值与对照组比,值下降,说明细胞活力越低,毒性越大或者抑制增殖;如果是检测死细胞来反映毒性的,OD值越低,说明死细胞越少,毒性越小。


06

怎么检测药物对细胞的毒性作用还是过表达了基因的抑制作用?

EdU孵育时间由细胞周期决定,一般是细胞周期的1/10-1/5,大部分细胞系可采用孵育2小时的方式,也可以参考有些EdU增殖检测数据库中推荐的细胞孵育时间。


07

OD值一般范围多少比较好?

一般是在0.1-2.0之间,最好在1.0附近。


08

克隆培养期间需要换液吗?

可以进行1-2次换液,注意换液前预温培养基,沿壁加液。


09

3厘米的培养皿可以放多少培养基啊?

建议加3毫升左右。


10

过期一年的1640培养基还能用吗?

建议不要使用,如果是基础培养基,觉得扔掉比较可惜,可以当作PBS来使用,但要注意保持无菌。


11

室温放置了三天的培养基还能用吗?

培养基一般是4℃存放,放室温3天,需要观察下培养基颜色,有无浑浊、沉淀和絮状物,如果是培养液中添加了一些特殊因子,需要考虑添加因子的稳定性,如果没有以上异常情况,可以使用。


12

胰蛋白酶冷消化组织后,都是黏液组织,离心也没办法,怎么把黏液组织转移到新的管子里再进行二次消化呢?

如果是胰酶消化的时候出现粘液组织或者组织呈果冻状,可能是组织中细胞损伤大,释放的DNA胶体包裹细胞碎片。建议观察是不是消化液的体积较少,可以用低浓度的胰酶或者消化作用更温和的胶原酶消化,同时也可以加Dnase I。


13

人成纤维细胞很难消化,每次都不能完全消化下来,有什么办法可以解决?

细胞难消化,与消化用的胰酶浓度、胰酶温度、胰酶是否充分浸润、胰酶是否含EDTA、培养瓶是否包被等因素有关,建议从以上方面进行调整。

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